杂交瘤细胞无血清驯化

杂交瘤细胞从含血清培养到无血清培养过程可采用梯度降血清法进行，驯化过程一般建议静置培养，因为对于贴壁细胞来说，生长过程中摇动对其损伤较大。建议在24孔板内驯化，节约培养基。

1) 在24孔细胞培养板里，用原来含血清培养基将细胞培养至60%-70%覆盖板底，平行培养6孔；

2) 吸干板孔内原培养基，平行培养的6个孔内依次加入含梯度血清的无血清培养基^*1（血清梯度依次为10%-5%-2.5%-1.25%-0.5%-0%），每孔1.5ml培养基。

3) CO₂培养箱静置培养24小时，观察细胞状^*2，找到杂交瘤细胞生长最低血清浓度耐受点。

4) 在该血清浓度下适应性培养1-2天；

5) 再以该血清浓度耐受点为起始，重复步骤2，步骤3，直到细胞完全适用无血清培养基。

6) 细胞完全适用无血清培养基时，此时细胞处于悬浮或者半悬浮状态；在无血清培养基中扩大细胞培养；

7) 根据实际生产体积需要，按照10⁵/ml的量准备细胞，当细胞数量达标后，离心置换为新鲜无血清培养基，调整细胞密度为10⁵/ml，CO₂培养箱摇床培养，135rpm；

8) 细胞数量翻倍后，可以补充相同体积的新鲜无血清培养基继续培养。

 

9) 细胞培养至80%以上死亡，可以收集培养液，离心取上清，用于纯化抗体。

a.无血清培养基里已经加入了厂家配套的细胞生长因子；

b.细胞生长密度过大时，要及时传代稀释掉，保证细胞合理的密度。

 

无血清驯化过的杂交瘤细胞株，及时扩增繁殖，冻存保种，用于后续抗体生产。

细胞保存液配方为：10% DMSO+90% 无血清培养基。

 

大部分杂交瘤细胞经过驯化，在无血清培养基中抗体产量可轻松达到100~300mg/L。